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產品簡介:
葡萄糖-6-磷酸酶染色液是一種多存在于哺乳類動物肝、腎、腸等組織的膜結合酶,G-6-Pase 和微體緊密結合,定位于內質網,是內質網的主要標志酶,能把葡萄糖-6-磷酸水解成葡萄糖和磷酸。G-6-Pase 對維持血糖濃度的相對恒定有至關重要的作用,是糖代謝的關鍵酶。當血糖降低時,G-6-Pase 促進肝糖原轉變?yōu)檠?。當缺乏G-6-Pase 時,會引起糖原分解障礙,使糖原積累在肝、腎、心臟等部位,導致肝糖原儲積病。G-6-Pase zui適pH 為6.5,在pH6.0~8.0 亦可,pH8.0 zui穩(wěn)定,pH5.0易變性。組織化學反應多用pH6.5~6.7。
葡萄糖-6-磷酸酶染色液(鉛法)采用重金屬捕捉劑和磷酸結合顯示酶的活性。該酶對固定很敏感,組織經80%乙酸溶液固定后用石蠟包埋,G-6-Pase *被抑制。需用新鮮組織低溫恒冷切片,經甲醛短時固定酶即失活,但可短時低溫丙酮固定,但一般不固定。
操作步驟(僅供參考):
1、冰凍切片入蒸餾水清洗。
2、入G-6-Pase 孵育液,37℃孵育15~20min。
3、自來水沖洗后,蒸餾水沖洗。
4、在上述過程中配制ALP 硫化工作液,即取試劑(B)用蒸餾水稀釋50 倍, 即為ALP 硫化工作液,即配即用。切片入硫化工作液,孵育1min。
5、自來水水洗3~5min。
6、(可選)入中性福爾馬林,固定2min。
7、入蒸餾水水洗2 次。
8、甘油明膠封片
鉛法:葡萄糖-6-磷酸水解后所釋放出磷酸,為*所捕獲,經硫化銨處理,zui終反應產物為顆粒狀的硫化鉛沉淀。反應通式如下:
葡萄糖―6―磷酸鈉+H2 O 葡萄糖 -6- 磷酸酶 葡萄糖+磷酸 Pb(NO3 )2 Pb3 (PO4 )2 (NH4 )2 S PbS↓
1)孵育液配制(新鮮配制)
0.125%葡萄糖―6―磷酸鈉 4ml
0.2mol/LTris-順丁烯二酸鹽緩沖液(pH 7.4) 4ml
2%Ph(N03 )2 (2.5%) 0.6ml
蒸餾水 1.4ml
充分混合后使用
2)染色程序:
①新鮮組織冰凍切片;
②10%福爾馬林固定5分鐘后水洗;
③切片入孵育液中,37℃孵育20分鐘水洗;
④人1%硫化銨水溶液中1分鐘水沖洗;
⑤3%福爾馬林后固定10分鐘;
⑥甘油明膠封固。
3)結果:酶活性處顯棕色。
4)對照實驗:①除去底物;②以F―甘油磷酸鈉代替底物;③以0.01mol/L氟化鈉作為抑制劑。